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凝胶回收试剂盒(含柱)

简要描述:凝胶回收试剂盒(含柱)
本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的最大吸附量为 20µg,对 100-10000 bp 线性双链 DNA 片段的回收效率可高达 50-90%,也可用于单链 DNA 片段和质粒 DNA 的纯化。

  • 产品型号:C6203
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-05-21
  • 访  问  量: 373

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详细介绍

品牌Bioss货号C6203
供货周期现货应用领域医疗卫生,化工,生物产业,制药

凝胶回收试剂盒(含柱)

保存条件 室温干燥可保存一年,4℃保存可更长时间。

使用时如发现结晶,可于 37~55˚C水浴加热助溶。离心吸附柱不建议低温或大于 30˚C 保存,否则可能影响吸附效率。

凝胶回收试剂盒(含柱)

产品简介

胶回收试剂盒利用硅基质材料在高盐缓冲系统对 DNA 高效、专一吸附的原理,配备聚合美自主研发的膜结合液(又称溶胶液)和高性能的硅胶膜离心吸附柱,可在 15 分钟内清除凝胶、核酸染料及其他杂质,高效回收 DNA 片段。本试剂盒配套的膜结合液和离心吸附柱的最大吸附量为 20µg,对 100-10000 bp 线性双链 DNA 片段的回收效率可高达 50-90%,也可用于单链 DNA 片段和质粒 DNA 的纯化。因回收率受 DNA 片段大小、浓度等因素的综合影响,故应尽量加大电泳的 DNA 片段浓度,以提高回收率。回收后的 DNA 片段可以直接用于酶切、连接、测序、标记、杂交和体外转录等多种分子生物学实验。



回收效率

50 bp 回收效率:30-50%

100-200 bp 回收效率:50-70%

200-5000 bp 回收效率:70-90%

5 kb-10 kb 回收效率:50-70%



产品组份

膜结合液(MB):25ml (50T)

膜漂洗液(MW):15ml (50T) 初次使用前请按瓶标说明加入无水乙醇混匀

洗脱缓冲液(EB):10ml (50T)

平衡液(BL):25ml (50T) 请使用当天平衡液处理过的吸附柱

离心吸附柱及收集管:50(50T) 室温密闭干燥保存



实验准备

用户需自行准备的材料:含 DNA 样品的琼脂糖凝胶,无水乙醇,异丙醇, 55ºC 水浴,切胶设备,台式离心机。

初次使用本试剂盒,请按瓶标说明向膜漂洗液(MW)中加入相应体积的无水乙醇(用户自备),并在试剂瓶上做标记。



操作步骤

1. 柱平衡:向吸附柱中(吸附柱放入收集管中)加入 400 μl 的平衡液 BL,12,000 rpm (-13,400×g ) 离心 1 min,弃收集管中滤液,将吸附柱重新放回收集管中。(请使用当天处理过的柱子,这一步很重要,试剂盒放置时间长不用,处理一下效果如新,减少浪费。如果新开封马上用,可以不做柱平衡)

2. 切胶:用干净刀片将目的 DNA 条带切下,尽量切除不含 DNA 的凝胶。注意:紫外线对 DNA 片段有损坏作用,切胶要迅速,避免长时间照射,同时做好眼睛及皮肤的防护。

3. 称重:将切下的含有目的 DNA 条带的凝胶切成小块,放入已称重的 1.5 ml 塑料离心管中,再称重(总重-空重=净重)。

4. 溶胶:加入等体积膜结合液(MB),60℃水浴,每隔 2-3 min 上下振荡,直到凝胶*溶解。注意:如凝胶重量为 100 mg,其体积可视为 100 ul,则加入 100 ul 膜结合液;如凝胶浓度大于 2%,所用膜结合液体积加倍;对于  回收

<300 bp 的小片段或者大于 3000bp 的大片段,可在凝胶*溶解后再加入 1/2 胶块体积的异丙醇以提高回收率;胶块*溶解后最好将溶液温度降至室温再上柱,因为吸附柱在室温时结合 DNA 的能力较强。

5. 吸附:待溶液冷却后加入离心吸附柱中,室温静置 2 min,让 DNA 片段与吸附柱中的硅胶膜充分结合,然后 12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中滤液。注意:如总体积超过 750 ul 可分 2 次将溶液加入同一离心吸附柱中;为增加目的 DNA 片段的洗脱浓度,也可将多管溶胶液加入到同一离心吸附柱中。

6. 清洗:加入 600 ul 的膜漂洗液(MW),12,000 rpm 离心 1 min,弃收集管中废液。注意:膜漂洗液(MW)按要求加入乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防酒精挥发; 如后续实验要求纯度较高,可再清洗一次。

7. 干燥:将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min,甩干残留漂洗液。注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响后续实验。

8. 洗脱:将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管中,在吸附柱中央加入 30-50 ul 洗脱缓冲液(EB),室温放置 2 min。12,000 rpm 离心 1 min 收集 DNA 片段。注意:为增加回收效率,可将洗脱液在 60℃预热,也可将得到的溶液重新加入到离心管中,室温放置 2 min,再次离心收集。如需使  用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0-8.5 之间)。




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