浅析细胞凋亡试剂盒使用注意事项

　　细胞凋亡试剂盒是用FITC标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸的一种细胞凋亡试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。

　　细胞凋亡是指细胞在生长到一定阶段及某些生理过程中，会受到多因素和机制的严格调控而进入死亡。这是一个动态的过程，会涉及一系列复杂的生化反应， 是一个需要酶参与的级联反应，同时也涉及不同基因的表达及调控、信号传导。其中有几项生理过程能被用来检测凋亡的发生，因此多参数分析法对于准确检测这一过程十分重要。同时，了解细胞死亡和存活机制也是毒理分析和药物研发应用中一个非常关键的内容。

　　细胞凋亡的经典进程：

　　1.Caspase的激活在凋亡信号响应中起关键作用；

　　2.线粒体膜电位降解；

　　3.Caspase继续引发关键的蛋白水解表达凋亡相关蛋白；

　　4.细胞膜组成改变，作为引发凋亡细胞的内吞作用的信号；

　　5.DNA片段化，基因组的打断是凋亡过程中-个不可逆的过程。

　　注意事项：

　　1.尽管经测试细胞凋亡试剂盒反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。

　　2.如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。

　　3.染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

　　4.如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解细胞凋亡试剂盒，导致染色失败。

　　5.荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。

　　6.用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。

　　7.需自备PBS。

　　8.细胞凋亡试剂盒仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

　　9.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。