脂质体2000转染试剂

脂质体2000转染试剂

保存条件 2-4℃保存一年（避免冷冻）。

脂质体2000转染试剂

产品简介：

Lip2000 是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸（DNA 和 RNA）转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（脯乳动物细胞系）的转染。

质粒 DNA 转染：

对大多数细胞来说，DNA（µg）与 Lip2000（µI）的比例为 1:2~3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。

1.  以 24 孔板为例

a.  贴壁细胞：转染前一天，用 500 µI 不含抗生素的培养基接种 0.5-2×10

⁵ 细胞，使之第二天能达到 70- 90%汇合。

b.  悬浮细胞：在准备 DNA-Lip2000 复合物之前，用 500 µI 不含抗生素的培养基接种 4-8×10

⁵ 细胞即可。

2.  对每个转染样品，进行以下操作

a.  在eppendorf管里分别加入50 µI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA，轻柔混匀，制成DNA稀释液。

b.  在另一个eppendorf管里分别加入50 µI Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和2.0 µI Lip2000（注意用前 先混 匀），轻柔混匀，制成Lip2000 稀释液，室温静置5分钟。

c.  将DNA稀释液和Lip2000稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟，形成DNA-Lip2000复合物。DNA-Lip2000复合物在室温下可稳定存在6小时。

3.  将DNA-Lip2000复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。

4.  在37℃ 二氧化碳培养箱中培养4-6小时后更换培养基，继续培养18-48小时。

5.  如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加入选择性培养基进行筛选。

质粒DNA转染的优化为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和Lip2000的比例以及细胞密度进行优化，一般在1: 0.5~5的范围内优化DNA （µg）和Lip2000（µI）的比例。