膜粘连蛋白5抗体

膜粘连蛋白5抗体

交叉反应 Human,Mouse,Rat,Dog,Pig,Cow,GuineaPig,

产品应用 WB=1:500-2000,ELISA=1:5000-10000

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膜粘连蛋白5抗体

膜粘连蛋白-5是一种分子量为35～36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。

将膜粘连蛋白5进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。

其意义：检测早期凋亡的细胞，同时可区分活细胞和坏死细胞

磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。

　　    碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

　　                        将Annexin-V进行荧光素标记，检测早期凋亡的细胞

方法：

　　  1 悬浮细胞的染色：将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞（0.5～1×10

⁶）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V（20ug/ml）10ul，室温避光30min，再加入PI（50ug/ml）5ul，避光反应5min后，加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan进行流式细胞术定量检测（一般不超过1h）， 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。

　　  2 贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。

　    3 爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。

　　     注意事项：

　　1 整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。

　　2 操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。