TUNEL细胞凋亡检测试剂盒实验流程

　　TUNEL细胞凋亡检测试剂盒的实验流程会根据样本类型(细胞、石蜡切片、冰冻切片)略有差异，以下是通用标准化操作步骤，可直接参考执行。
 

　　一、TUNEL细胞凋亡检测试剂盒实验前准备

 

　　‌试剂预处理‌：将试剂盒内各组分短暂离心，收集管底残留液体，提前准备好PBS缓冲液、4%多聚甲醛固定液、通透剂等配套耗材。
 

　　‌样本预处理‌：根据样本类型完成基础处理，贴壁细胞用PBS轻洗1次，石蜡切片完成二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化。
 

　　二、固定与通透
 

　　‌固定‌：用4%多聚甲醛室温固定样本30~60分钟，之后用PBS洗涤1~2次。
 

　　‌通透‌：加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟；石蜡切片可改用20μg/mL的蛋白酶K，37℃孵育15~30分钟，之后用PBS充分洗涤3次，避免残留酶干扰后续反应。
 

　　三、标记反应
 

　　‌平衡‌：滴加TdT Equilibration Buffer覆盖样本，37℃湿盒中平衡10~30分钟。
 

　　‌配制检测液‌：按比例混合TdT酶与荧光标记液，现配现用，单次用完不可冻存。
 

　　‌孵育标记‌：每个样本滴加50μL TUNEL检测液，放入湿盒中37℃避光反应60分钟，避免反应液蒸发。
 

　　四、复染与观察
 

　　‌洗涤‌：用PBS充分洗涤样本3次，每次5分钟，去除未结合的标记液。
 

　　‌复染封片‌：滴加DAPI工作液室温避光孵育5分钟，用含抗荧光淬灭剂的封片剂完成封片。
 

　　‌检测拍照‌：荧光显微镜下选择对应激发/发射波长观察，绿色荧光用450~500nm激发、515~565nm发射通道，完成图像采集。
 

　　五、阳性对照设置
 

　　滴加100μL 1X DNase Buffer到已通透的样本上，室温平衡5分钟。
 

　　滴加DNase工作液37℃孵育10分钟，人为诱导DNA断裂，后续按正常流程完成标记，可验证实验体系有效性。